HPLC法在线衍生测定中华绒螯蟹中17种氨基酸含量

作者：申兆栋; 黄冬梅^*; 孔聪; 叶洪丽; 席寅峰; 方长玲; 伍姿; 张俊

来源：分析试验室, 2021, 40(05): 552-557.

DOI：10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2020.100101

• 高效液相色谱法
• 3,3’-2硫代-2丙酸
• 邻苯二甲醛
• 9-芴甲基氯甲酸酯
• 柱前在线衍生化
• 17种氨基酸含量

建立了中华绒螯蟹中17种氨基酸同时测定的反相高效液相色谱法。样品用HCl溶液在110℃水解24 h,水解液用NaOH溶液中和,以邻苯二甲醛(OPA)和9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)为柱前衍生化试剂,采用3,3’-2硫代-2丙酸(DTDPA)将水解液中半胱氨酸氧化为S-2-羧乙基硫代半胱氨酸(Cys-MPA),实现对半胱氨酸的保护。采用AdvanceBio AAA氨基酸专用色谱柱进行分离,以Na2B4O7、Na2HPO4缓冲液与乙腈、甲醇为流动相,在线衍生进样、梯度洗脱,紫外检测器检测,外标法定量。结果表明:17种氨基酸在1～200μg/mL的范围内与各自峰面积呈良好的线性关系,其线性相关系数(R2)在0.9973～1.0000之间,检测限为0.12～0.30μg/mL;在2.30,4.60,6.90 mg/g 3个加标浓度下的平均加标回收率在82.6%～115.2%之间,相对标准偏差(RSDs)为0.7%～4.8%。该方法实现了同时对中华绒螯蟹中半胱氨酸以及其他一级、二级氨基酸的准确定量。

• 单位
  中国水产科学研究院东海水产研究所; 上海海洋大学; 农业部