Notch信号通路对婴幼儿血管瘤间充质干细胞成脂分化的影响

作者：王维东; 沈卫民^*; 韩涛; 王媛; 陈昇; 林家玮

来源：中华整形外科杂志, 2023, 39(07).

• 血管瘤
• 间充质基质细胞
• Notch信号通路
• 成脂分化

目的研究Notch信号通路对婴幼儿血管瘤间充质干细胞(Hem-MSCs)成脂分化的影响及其可能机制。方法选取2021年1至6月南京医科大学附属儿童医院烧伤整形科手术切除的10例婴幼儿血管瘤标本(男6例, 女4例, 年龄2至6个月, 平均3.5个月)。用贴壁筛选法从增生期血管瘤中分离Hem-MSCs, 通过流式细胞术进行鉴定。鉴定成功后进行成脂诱导。使用实时荧光定量PCR检测Hem-MSCs成脂诱导14 d后Notch1、Jagged1及Hes1基因表达情况。在Hem-MSCs培养基中分别加入Notch信号通路抑制剂DAPT、PI3K/AKT信号通路激动剂740Y-P及溶剂DMSO, 再进行成脂诱导。将细胞分为6组:空白对照组、成脂诱导组、成脂诱导+DMSO组、成脂诱导+DAPT组、成脂诱导+740Y-P组、成脂诱导+DAPT+740Y-P组。成脂诱导7 d后, 蛋白质印迹法检测成脂诱导+DMSO组、成脂诱导+DAPT组、成脂诱导+DAPT+740Y-P组p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白表达情况;成脂诱导14 d后, 实时荧光定量PCR检测上述6组细胞中成脂分化关键转录因子中PPARγ和C/EBPα基因表达情况;油红O染色鉴定成脂效果。两组间比较采用t检验, 多组间比较采用方差分析, 组内比较采用SNK-q检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果 Notch1、Jagged1及Hes1在Hem-MSCs成脂诱导过程中表达逐渐降低, 差异均有统计学意义(tNotch1=8.99, PNotch1=0.008;tJagged1=9.49, PJagged1=0.007;tHes1=7.74, PHes1=0.015)。在Hem-MSCs成脂诱导过程中加入Notch信号通路抑制剂DAPT后, PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达降低, 差异有统计学意义(qp-PI3K=4.78、Pp-PI3K=0.014, qp-AKT=5.04、Pp-AKT=0.010);相关成脂指标表达增高(q油红O=6.07, P油红O=0.003;qPPARγ=17.34, PPPARγ<0.001;qC/EBPα=14.8, PC/EBPα<0.001), 差异均有统计学意义。加入PI3K/AKT信号通路激动剂740Y-P后, 相关成脂指标无明显变化, 差异均无统计学意义(q油红O=1.82, P油红O=0.786;qPPARγ=0.97, PPPARγ=0.981;qC/EBPα=1.98, PC/EBPα=0.654)。同时加入DAPT和740Y-P后, 相关成脂指标表达降低(q油红O=5.22, P油红O=0.013;qPPARγ=9.78, PPPARγ<0.001;qC/EBPα=16.74, PC/EBPα < 0.001)结论抑制Notch信号通路可以通过降低PI3K/Akt信号通路活性促进Hem-MSCs向脂肪细胞分化。

• 单位
  南京医科大学