PD-L1靶向单域抗体的定点标记及生物学评价

作者：陈银飞; 陈盼盼; 朱诗宇; 梁蓓蓓; 谢敏浩; 林建国; 邱玲^*

来源：中华核医学与分子影像杂志, 2022, 42(12).

• 程序性细胞死亡受体1
• 单域抗体
• 同位素标记
• 镓放射性同位素
• 肿瘤细胞, 培养的
• 正电子发射断层显像术
• 小鼠, 裸

目的设计合成68Ga-1, 4, 7, 10-四氮杂环十二烷-1, 4, 7, 10-四乙酸(DOTA)-半胱氨酸-天冬氨酸-缬氨酸(CDV)-Nb109, 探讨其用于检测不同肿瘤中程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-L1)表达水平的潜力。方法采用基因工程技术将CDV引入单域抗体Nb109序列的尾部, 通过马来酰亚胺-半胱氨酸定点偶联策略, 将马来酰亚胺-DOTA与CDV-Nb109(物质的量比1∶1)反应制备前体DOTA-CDV-Nb109, 随后进行68Ga标记并用PD-10脱盐柱纯化。建立人黑色素瘤A375、人源性PD-L1转染的A375-hPD-L1及人胶质瘤U87荷瘤裸鼠模型, 通过稳定性分析、细胞摄取和microPET显像评价68Ga-DOTA-CDV-Nb109的诊断价值。采用单因素方差分析和最小显著差异t检验分析数据。结果 68Ga-DOTA-CDV-Nb109放射化学产率为(69.79±4.69)%, 放化纯大于97%, 摩尔活度为(12.85±1.51) GBq/μmol。68Ga-DOTA-CDV-Nb109与A375-hPD-L1细胞具有较强的亲和力, 解离常数(Kd)为(66.43±17.89) nmol/L。68Ga-DOTA-CDV-Nb109在A375-hPD-L1细胞[(3.17±0.15)百分加入放射性剂量(%AD)]、U87细胞[(2.08±0.03) %AD]中的摄取明显高于A375细胞[(1.21±0.14) %AD;F=82.87, t值:15.23、9.98, P值:<0.001、0.003]。68Ga-DOTA-CDV-Nb109在A375-hPD-L1[(5.21±0.35)每毫升百分注射剂量率(%ID/ml)]和U87[(3.44±0.69) %ID/ml]荷瘤裸鼠肿瘤中的摄取显著高于A375荷瘤裸鼠[(2.17±0.36) %ID/ml;F=249.72, t值:35.70、3.43, 均P<0.001]。结论成功制得定点标记的PET探针68Ga-DOTA-CDV-Nb109, 可无创、动态监测不同肿瘤中PD-L1表达水平的变化, 在PD-L1免疫检查点阻断治疗潜在受益患者筛选方面具有应用潜力。

• 单位
  江苏省原子医学研究所