摘要
目的:采用RNA干扰技术选择性的沉默宫颈癌Ca Ski细胞株中HPV-16 E6基因的表达。为观察HPV-16 E6基因的小干扰片段能否在Ca Ski细胞特异性的抑制E6基因的表达,构建能在哺乳动物细胞中表达E6小干扰RNA的真核表达质粒,并观察其转染效率。方法:根据HPV-16 E6基因序列,设计特异性的小干扰片段,并将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1上,将其转染至Ca Ski细胞中,观察荧光表达,鉴定其转染效率。结果:通过酶切鉴定和序列测定,成功的构建二条表达小干扰RNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功的转染到Ca Ski细胞株中,转染效率达到50%以上。结论:siRNA真核表达载体的构建及体外转染的成功为下一步研究奠定了良好的基础。
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单位重庆医科大学; 公共卫生学院; 基础医学院