基于ORF3基因检测猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR方法的建立与应用

作者：冉伟; 田宇; 李梓健; 张金悦; 赵飞宇; 李璐; 孔凡志; 孙东波

来源：中国预防兽医学报, 2020, 1-6.

• 猪流行性腹泻病毒
• 荧光定量RT-PCR
• ORF3基因 Porcine epidemic diarrhea virus
• real-time RT-PCR
• ORF3 gene

为建立猪流行性腹泻病毒（PEDV）的荧光定量RT-PCR检测方法，本研究参照已有的研究报告，对PEDV ORF3基因序列进一步比较优化，选择PEDV ORF3更为保守的序列设计引物，经PCR扩增目的片段后构建了PEDV ORF3基因的质粒标准品pMD18-T-ORF3，以其为模板，经反应条件优化，建立了基于PEDV ORF3基因的SYBR Green I定量RT-PCR检测方法。结果显示，以重组质粒标准品构建的标准曲线的相关系数为0.9982，在10~(2)拷贝/μL～10~(10)拷贝/μL范围内具有良好的线性关系。该方法除对猪流行性腹泻病毒检测结果为阳性外，对猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒...

• 单位
  动物科技学院; 黑龙江八一农垦大学