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摘要
目的 探讨鞘氨醇激酶1(SphK1)抑制剂在不同肝纤维化大鼠模型中的治疗作用。方法 170只SD大鼠随机分为4组：正常组(30只)、HFE组(给予高脂乳剂，45只)、CCl4组(CCl4诱导，45只)、CCl4+HFE组(HFE联合CCl4,50只),经病理及实验室检查证实造模成功后，分别给予SphK1抑制剂PF-543,同组别以生理盐水作为对照，分别在第1、7、14天取肝组织进行Masson染色，比较肝纤维化面积占比、透射电镜下观察自噬小体形成情况、Real-time PCR检测肝纤维化及自噬相关标志物mRNA表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD检验。相关性分析采用Spearman相关分析。结果 与正常组(0.57±0.13)相比，CCl4组(6.93±5.81)和HFE+CCl4组(10.89±2.67)肝纤维化面积占比均升高(P值均<0.01)。PF-543干预第7天可显著降低CCl4组及HFE+CCl4组纤维化病变面积(P值均<0.01)。与正常组相比，HFE组、CCl4组和HFE+CCl4组的SphK1表达水平均明显降低(P值均<0.01),HFE+CCl4组的α平滑肌肌动蛋白、转化生长因子-β、α1-Ⅰ型胶原mRNA表达水平均明显升高(P值均<0.01),干预后各指标水平无明显变化(P值均>0.05)。Atg5、Atg12、Becn1的表达水平与肝纤维化病变面积均呈负相关(r分别为-0.715、-0.640、-0.632,P值均<0.01);SphK1的表达水平与Atg5、Atg12、Becn1、Map1lc3a的mRNA表达均呈正相关(r分别为0.603、0.561、0.510、0.498,P值均<0.01)。电镜示：CCl4组肝组织轻微水肿，细胞器丰富，轻度肿胀，以粗面内质网扩张为主。该视野可见9个自噬溶酶体结构。在PF-543干预第7天后，未见典型自噬结构。HFE+CCl4组肝组织轻度水肿，结构不清晰，粗面内质网数量丰富，明显扩张，表面附着核糖体颗粒较少。该视野可见6个自噬溶酶体结构。在PF-543干预第7天后，该视野未见典型自噬结构。结论 PF-543对自噬有显著抑制作用，并同时伴有纤维化面积的减少。提示靶向SphK1,可影响到肝脏的自噬水平，并进而缓解两种肝纤维化模型的纤维化状态。
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单位中国科学院新疆理化技术研究所; 成都中医药大学; 维吾尔自治区中医医院
