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摘要
为探究具有抑菌作用的苦杏仁肽的制备、富集及结构分析，本实验以苦杏仁为原料，在脱脂后使用碱溶酸沉提蛋白，使用不同蛋白酶酶解杏仁蛋白。研究各酶解物对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑制活性，筛选出制备抑菌肽最佳的蛋白酶。响应面法优化抑菌肽的制备工艺，用超滤和凝胶过滤色谱富集分离抑菌组分，筛选出抑菌活性最强组分进行结构分析。结果表明，木瓜蛋白酶酶解物对于革兰氏阳性菌尤其是金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强。通过对酶解制备苦杏仁抑菌肽的工艺进行优化，得到最佳制备工艺：酶解温度为74 ℃，酶底比为2.5%，pH为7。在此条件下，酶解3 h得到抑菌肽的蛋白浓度为19.21%，并测得最低抑菌浓度为3.13 mg/mL。利用超滤和凝胶过滤色谱(SephadexG-25)对抑菌组分进行富集处理，从中筛选出肽组分A-Ⅱ-b对革兰氏阳性菌的抑制活性最强。并对凝胶过滤方法加以优化，确定了A-Ⅱ-b的最佳分离纯化条件：样品浓度9.38 mg/mL，洗脱速度0.68 ml/min、洗脱剂为纯水。在此条件下测得A-Ⅱ-b的峰面积比13.15%。采用液相色谱质谱/质谱联用（liquid chromatography tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）对抑菌组分A-Ⅱ-b进行结构分析，通过UNIPROT数据库与APD3数据库进行匹配，筛选出7种分子量在1500-2500Da的潜在具有抗菌活性的苦杏仁肽序列，分别是ALPDEVLQNAFRIS、ESWNPRDPQFQWAGVA、VAYWSYNNGEQPLVA、FLDLSNDQNQLDQVPR、GENDNRNQIIRVR、RNLQGENDNRNQIIRVR和RALPDEVLQNAFRIS。促进了杏仁活性肽的深度开发和资源再利用，同时也为其作为抑菌肽的研究和进一步开发利用提供理论依据。
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