基因工程表达内含肽介导的抗菌肽（MME）及其酰胺化

作者：叶若柏; 吴珍红; 缪晓青^*

来源：福建农业学报, 2020, 35(11): 1265-1270.

DOI：10.19303/j.issn.1008-0384.2020.11.013

• 抗菌肽
• 酰胺化
• 内含肽介导
• 自剪切

【目的】探讨在巯乙基磺酸钠(MESNa)与碳酸氢铵(NH4HCO3)存在下,对在大肠杆菌上表达的重组融合蛋白中内含肽(Intein)用硫醇(DTT)进行自剪切,促使抗菌肽(MME)碳末端实现酰胺化。【方法】构建用大肠杆菌表达内含肽介导的MME重组质粒,通过表达获得依次由"组氨酸、Sumo标签、MME、内含肽"构成的融合蛋白,用镍柱及透析进行纯化,在MESNa和NH4HCO3存在下,用DTT对内含肽进行自剪切,促使MME碳末端酰胺化,肠激酶切割、纯化,得到碳末端酰胺化的MME。质谱和二级串联质谱配合使用,检测MME及其碳末端酰胺化。【结果】通过PCR,鉴定融合蛋白,其基因片段为837 bp,符合预期。质谱鉴定得MME相对分子量为3 057.7与其理论值3 057.64一致。二级串联质谱检测得MME碳端碎片的分子量为1 214.728,与碳末端酰胺化的MME碳端碎片理论分子量1 214.739相符,匹配度为45,表明本研究制备的MME碳末端已被酰胺化,该蛋白为可溶。【结论】用大肠杆菌成功地表达了重组融合蛋白,在MESNa与NH4HCO3存在下,促进了内含肽自剪切,MME碳末端被酰胺化,实现了简单的"一步法"制备。质谱与二级串联质谱配合使用,可灵敏、简单地对碳末端酰胺化多肽进行检测,可作为该项检测方法的一种选择,结果表明,本研究成功地制备了碳末端酰胺化的MME。

• 单位
  动物科学学院; 福建农林大学