梅花鹿γ干扰素克隆表达及抗病毒活性测定

作者：刘颖; 刘冬光; 廖娟红; 于清龙; 熊家军; 杨利国; 陈焕春; 郭爱珍

来源：动物医学进展, 2009, 30(11).

DOI：10.3969/j.issn.1007-5038.2009.11.001

• 梅花鹿
• γ干扰素
• 抗病毒活性

提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为梅花鹿γ干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%.将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠埃希菌BL21中实现了高效表达.表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的32.6%.用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性,重组梅花鹿γ干扰素抗病毒活性分别约为7.25×104 U/mL和4.61×104 U/mL.结果表明,重组梅花鹿γ干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定.

• 单位
  华中农业大学