BVDV-1型SYBR Green I荧光定量PCR方法的建立与初步应用

作者：付兢锋; 陈姗; 马浩原; 祝昆儒; 牟碧莹; 薛皓文; 宋彦昊; 李强; 高旭

来源：中国动物传染病学报, 2022, 1-9.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20221207.001

• 牛病毒性腹泻病毒
• 荧光定量
• 临床应用

本研究构建了一种牛病毒性腹泻病毒1型（Bovine viral diarrhuea virs， BVDV-1）的高效临床检测方法。利用SYBR Green I荧光定量PCR扩增BVDV-1保守基因5’UTR的片段（124 bp），并构建重组质粒作为阳性标准品，建立标准曲线，对该方法的敏感性、特异性和重复性进行验证，同时采集临床样品，评价其检测效率。结果显示：BVDV-1阳性标准品在1.169×108～1.169×101拷贝/μL范围内呈良好的线性关系，相关系数R2=0.997，熔解曲线无非特异性峰产生；重复性试验组内和组间变异系数低于2%；敏感性试验最低检测拷贝数为1.169×101拷贝/μL，为普通PCR的100倍；特异性良好，与BEV、BEFV、IBRV、BPIV3无交叉反应产生。采用建立的BVDV-1 SYBR Green I荧光定量方法检测62份牛腹泻粪便样品，阳性率为46.77%，高于普通PCR 20.97%。本研究成功建立了BVDV-1荧光定量方法，该方法特异性强，灵敏度高，重复性稳定，可用于养殖业BVDV-1临床的快速检测。

• 单位
  延边大学