大鼠GAD65基因慢病毒载体的构建及其在MSCs中的表达

作者：赵元淑; 邓镇; 陈丽; 周玉波; 马猛; 罗亚楠; 胡景鑫; 雷水生; 朱晓琴

来源：中风与神经疾病杂志, 2015, 32(05): 398-401.

DOI：10.19845/j.cnki.zfysjjbzz.2015.05.003

• 慢病毒
• GAD65
• 间充质干细胞
• 癫痫

目的构建谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65,GAD65)重组慢病毒表达载体,感染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)并进行鉴定。方法 PCR法扩增GAD65基因,构建LV5-GFP-GAD65慢病毒载体;与包装质粒共转染293T细胞包装病毒;将慢病毒感染大鼠MSCs,荧光显微镜鉴定转染率,Western blot检测GAD65的表达。结果双酶切及测序结果表明LV5-GFP-GAD65慢病毒载体构建成功;包装病毒产生的病毒液滴度为5×107TU/ml;慢病毒感染大鼠MSCs的转染率高于90%,Western blot结果显示GAD65蛋白表达比对照组明显升高。结论 GAD65重组慢病毒载体构建成功,包装得到高浓度病毒液,感染大鼠MSCs能稳定过表达GAD65蛋白,为进一步探索侧脑室注射基因化的MSCs治疗癫痫奠定实验基础。

• 单位
  广州医科大学; 广州医科大学附属第五医院