鼠疫耶尔森菌重组酶聚合酶核酸扩增荧光检测方法的建立

作者：裴美娟; 李淑磊; 李梦蓝; 刘朝阳; 宋娜; 王玉飞^*

来源：武警医学, 2022, 33(04): 339-342.

DOI：10.14010/j.cnki.wjyx.2022.04.015

• 鼠疫耶尔森菌
• 重组酶聚合酶扩增技术
• 核酸检测

目的 建立一种简单，快速的重组酶聚合酶核酸扩增技术检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法 基于耶尔森氏菌的特异性序列设计引物及探针；通过对不同温度的检测来优化反应温度；通过对不同菌株的DNA模板进行检测评价该方法的特异性；通过对不同稀释浓度的样本DNA模板进行检测来确定灵敏性；通过模拟样品进行应用评价。结果 基于鼠疫耶尔森菌的DNA腺嘌呤甲基化酶基因设计特异性引物和探针所建立的荧光重组酶聚合酶扩增方法，35℃反应20 min内可成功检出低至100个拷贝的鼠疫耶尔森菌基因，而且与其他菌无交叉反应，对模拟样品的检测准确性达到98.0%。结论 重组酶聚合酶核酸扩增可广泛应用于简陋条件下鼠疫耶尔森菌的临床检测，促进鼠疫的防控。

• 单位
  解放军总医院; 锦州医科大学