敲减烟酰胺磷酸核糖转移酶基因促进转化生长因子β_1诱导的人胚肺成纤维细胞自噬功能的观察

作者：周静; 张维; 何杰^*

来源：中国医药, 2022, 17(03): 443-447.

• 特发性肺纤维化
• 烟酰胺磷酸核糖转移酶
• 生物信息分析
• 自噬

目的 探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)基因的表达对转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导的人胚肺成纤维细胞系MRC-5细胞自噬功能的影响。方法 基于基因表达综合数据库和人类自噬基因数据库，运用R软件筛选出GSE53845、GSE10667数据集中差异表达的自噬相关基因NAMPT。选择2018年1月至2020年3月于成都医学院第一附属医院就诊的50例经纤维支气管镜冷冻肺活检确诊的特发性肺纤维化(IPF)患者的病变肺组织标本作为IPF组，选择同期50例经外科手术治疗的早期肺腺癌患者的正常肺组织样本作为对照组，验证组间NAMPT的表达差异。将人胚肺成纤维细胞系MRC-5细胞分为空白对照组、TGF-β_1组、阴性对照组以及运用小干扰RNA敲减的NAMPT(si-NAMPT)组，应用蛋白质印迹法检测各组自噬相关蛋白表达，噻唑蓝比色法检测各组细胞活力，并应用单丹磺酰尸胺(MDC)染色对转染后细胞自噬体进行测定。结果 IPF肺组织中NAMPT mRNA的相对表达量高于正常肺组织[(3.7±2.3)比(1.4±0.7)],差异有统计学意义(t=6.804,P=0.001)。TGF-β_1组MRC-5细胞NAMPT蛋白表达量明显高于空白对照组和si-NAMPT组[(1.178±0.087)比(0.461±0.070)、(0.564±0.066)](均P<0.05),与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。TGF-β_1组自噬相关蛋白表达水平明显低于空白对照组，si-NAMPT组明显高于TGF-β_1组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。TGF-β_1组MRC-5细胞活力明显高于空白对照组和si-NAMPT组[(1.69±0.18)比(0.66±0.04)、(0.94±0.06)](均P<0.05)。MDC染色结果显示TGF-β_1组MRC-5细胞内自噬体荧光斑点基本消失，si-NAMPT组细胞内见大量自噬体荧光斑点。结论 IPF组织中NAMPT呈现高表达，敲减NAMPT基因可以促进TGF-β_1诱导的MRC-5细胞的自噬功能并抑制细胞生长。

• 单位
  成都医学院第一附属医院; 成都医学院