胞内劳森菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者：刘昌锦; 魏黄思梧; 胡换仪; 肖童; 林敏; 刘小兰; 边彦超; 罗峰; 邓舜洲^*

来源：中国兽医学报, 2022, 42(04): 680-685.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.04.11

• 胞内劳森菌
• TaqMan实时荧光定量PCR
• 检测

为建立用于检测临床粪便样品中胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,L.intracellularis)的TaqMan荧光定量PCR方法，本研究参考GenBank中发表的L.intracellularis PHE/MN1-00株基因组序列设计50对引物，通过SYBR GreenⅠ荧光染料法PCR验证引物的特异性，针对扩增效率最好的特异性上、下游引物合成相应的TaqMan探针，优化反应条件，对其线性范围、敏感性和重复性进行验证，系统的完成了该方法的建立。结果表明，所建立的TaqMan荧光定量PCR方法，特异性强；在靶标核酸为2.95×101～2.95×106拷贝/μL区间线性关系良好，相关系数R2=0.998 1,扩增效率为96.51%;最低检测浓度为5拷贝/μL;批间和批内的CV均小于2%,重复性好。使用普通PCR方法与本方法对2020年10月至2021年2月采自江西地区猪场的373份粪便样品进行检测，L.intracellularis的总检出率分别为21.4%(80/373)和27.6%(103/373),显示本方法具有更高的敏感性，其检测场阳性率为88.9%(8/9),各阶段生产猪群阳性率分别为经产母猪28.7%、保育仔猪36.4%和育肥猪14.3%。该检测结果为江西地区的L.intracellularis的流行情况提供参考。

• 单位
  江西农业大学; 江西金伊博生物科技有限公司