P62-ASC泛素化介导自噬对NLRP3炎症小体调节的机制研究

作者：张雷; 朱稀雯; 何堃; 龚建平; 彭自力^*

来源：重庆医学, 2021, 50(04): 541-546.

• 自噬
• 泛素化
• NLR家族,热蛋白结构域包含蛋白3
• 原癌基因蛋白质c-myc

目的探讨棕榈酸(PA)刺激下P62介导的自噬和含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)炎症小体相互作用机制。方法分离培养小鼠Kupffer细胞(KCs),分对照组、PA组、渥曼青霉素组和雷帕霉素组。Western blot测定各组KCs中LC3、NLRP3、凋亡相关点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸酶-1(caspase-1)及Beclin-1表达水平的变化,激光共聚焦显微镜观察P62与ASC,以及P62与LC3在细胞中的共定位情况;免疫共沉淀技术测定PA刺激前后P62与ASC、LC3之间的相互作用;Western blot测定PA处理12h前后ASC泛素化改变情况。结果与对照组比较,PA组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、NLRP3、ASC、caspase-1和Beclin-1表达水平明显升高(P<0.05)。而渥曼青霉素组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ较PA组下降,NLRP3、ASC及caspase-1表达水平较PA组增加(P<0.05);雷帕霉素组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ较PA组增加,而NLRP3、ASC及caspase-1表达水平较PA组减少(P<0.05)。激光共聚焦结果显示KCs中P62与ASC、P62与LC3共定位,且在PA处理24h后明显增强。免疫共沉淀结果表明,与对照组比较,PA组P62、ASC形成的共聚体明显增多。Western blot检测结果表明,PA组ASC泛素化水平较对照组增强。结论 KCs在PA刺激下,自噬与NLRP3炎症小体的表达均增强,且促进自噬能降低NLRP3炎症小体的表达,对KCs具有保护作用。P62对ASC泛素蛋白的识别在自噬对NLRP3炎症小体的调节中非常关键。

• 单位
  重庆医科大学附属第二医院; 重庆市奉节县人民医院