美洲鳗鲡腺瘤病毒(AEAdoV)普通PCR和SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者：孔文迪; 陈曦; 杨金先; 葛均青^*

来源：水产学报, 2023, 1-8.

• 美洲鳗鲡腺瘤病毒(AEAdoV)
• 普通PCR
• 荧光定量PCR
• SYBR Green I
• 检测方法
• 应用

为了建立美洲鳗鲡腺瘤病毒(AEAdoV)的检测方法，根据AEAdoV福建株(AEAdoV-FJ)的superfamily 3 helicases (S3H)序列，设计引物，建立了AEAdoV的普通PCR和qPCR检测方法；进一步评价检测方法的灵敏性、特异性及重复性，利用两种方法对美洲鳗鲡“出血性烂鳃”病料进行了检测，并对美洲鳗鲡体内不同组织的病毒含量进行了分析。结果显示，普通PCR扩增的目的片段长度约300 bp，利用其构建了qPCR质粒标准品，其拷贝数与qPCR的阈值循环数(CT)线性关系良好，线性范围广，标准曲线相关系数(R2)达到0.999，扩增效率为105.067％；建立的普通PCR法和qPCR的最低检测AEAdoV拷贝数分别为100个和10个。上述两种方法均可特异性检测AEAdoV，而对蛙虹彩病毒(RGV)、鳗鲡疱疹病毒(AngHV)、鲤疱疹病毒(KHV)、对虾白斑综合症病毒(WSSV)、日本鳗鲡内皮细胞坏死病毒(JEAdoV)和花鳗鲡腺瘤病毒(MEAdoV)均无扩增反应；qPCR法的组内和组间变异系数均小于2%，表明其重复性良好。临床应用结果显示，35份美洲鳗鲡“出血性烂鳃”病料，采用普通PCR法的AEAdoV检出率为82.8%，而qPCR法的AEAdoV检出率为97%。对美洲鳗鲡不同组织的病毒含量分析结果显示，心脏、肝脏、鳃、鳍的AEAdoV相对含量较高，而黏液、皮肤和脾的病毒含量相对较低。研究表明，建立了AEAdoV的灵敏度高、特异性强的普通PCR和qPCR检测方法，证实AEAdoV与美洲鳗鲡“出血性烂鳃”病密切相关，且在感染鳗鲡主要组织中都存在。上述结果对于研究AEAdoV的致病性，开展其流行情况和病原学情况分析具有重要意义。

• 单位
  福建省农业科学院