大肠杆菌醛醇脱氢酶的纯化、分析及其在乙酰辅酶A测定中的应用

作者：孙梅好; 刘杰; 袁熹; 蒲首丞; 巩菊芳^*

来源：浙江师范大学学报(自然科学版), 2022, 45(01): 82-87.

DOI：10.16218/j.issn.1001-5051.2022.01.012

• 醛醇脱氢酶
• 原核表达
• 乙酰辅酶A合成酶
• 酶活偶联测定

为了连续测定乙酰辅酶A合成酶(acetyl-CoA synthetase, ACS)催化的乙酰辅酶A(acetyl coenzyme A,Ac-CoA)合成,探讨以醛醇脱氢酶(aldehyde/alcohol dehydrogenase, AdhE)为偶联酶检测ACS活性的可行性.以大肠杆菌(Escherichia coli K12)基因组为模板扩增、克隆AdhE基因,通过原核表达、纯化获得AdhE,对其进行了酶学动力学分析,并进一步以AdhE为偶联酶对ACS活性进行了测定.结果发现:AdhE的kcat为13.8 min-1,Ac-CoA和NADH的Km分别为52.8和73.4μmol·L-1;ACS的kcat为10.5 min-1,乙酸和ATP的Km分别为1.31和0.15 mmol·L-1.表明基于AdhE的Ac-CoA检测体系切实可用,为Ac-CoA合成反应的连续测定奠定了良好的基础.

• 单位
  生命科学学院; 浙江师范大学