猪圆环病毒3型和4型TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者：殷冬冬; 王洁茹; 尹磊; 沈学怀; 戴银; 赵瑞宏; 侯宏艳; 胡晓苗; 王桂军; 潘孝成^*

来源：安徽农业大学学报, 2023, 50(06): 979-984.

DOI：10.13610/j.cnki.1672-352x.20231219.001

• 猪圆环病毒3型
• 猪圆环病毒4型
• TaqMan
• 实时荧光定量PCR

为了建立一种快速检测猪圆环病毒3型(PCV3)和4型(PCV4)的TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法，根据Gen Bank已登录的PCV3和PCV4基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针，经优化各反应条件，构建标准曲线，分析其敏感性、特异性和重复性，并利用建立的荧光定量PCR方法对采自安徽省的临床样品进行检测，与普通PCR方法进行一致性评价。结果显示，PCV3的标准曲线为Y=–3.534 6 logX+41.11(R2=1.00),PCV4的标准曲线为Y=–3.382 5 logX+40.67(R2=1.00)。PCV3和PCV4的检测限分别为49.5和27.1 copies·μL-1。对猪圆环病毒1型(PCV1)和2型(PCV2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)无特异性扩增，组内和组间变异系数均<1%。临床样品检测结果显示，PCV3阳性检出率为40.8%,PCV4阳性检出率为20.4%，混合感染率为19.0%。建立了灵敏、特异，可同时快速、准确鉴别PCV3和PCV4的TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法，为PCV3和PCV4的检测和监测提供技术支撑。

• 单位
  动物科技学院; 安徽农业大学; 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所