摘要
[目的]探讨多聚磷酸盐(inorganic polyphosphate, Poly P)对体外肌腱干细胞增殖和能量代谢的影响。[方法]分离培养大鼠肌腱干细胞,采用流式细胞术对其表面分子进行鉴定,然后用0、0.5、1.0 mmol/L的Poly P处理大鼠肌腱干细胞,行CKK-8、细胞周期实验和ATP能量检测,采用蛋白免疫印迹(Western blot)和免疫荧光检测I型胶原的表达。[结果]流式细胞分析表明>95%的分离细胞均表达CD44和CD90.1,几乎不表达CD45和CD106。CKK-8检测表明:随着培养时间的推移,三个浓度Poly P组的OD值均显著增加(P<0.05),培养4~24 h,OD值呈浓度依赖性增加,三组间差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞检测表明,Poly P呈浓度依赖性提高细胞G2+S期的百分比,差异有统计学意义(P<0.05)。ATP检测方面,随培养时间的推移,三个浓度Poly P组的ATP检测的标准值均显著增加(P<0.05)。Poly P可以促进大鼠肌腱干细胞的ATP合成,且呈浓度依赖性,培养4~24 h,三组间ATP检测的比值差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色方面,可见随Poly P的增加,I型胶原的荧光显色强度显著增加。Western blot检测表明0.5、1.0 mmol/L的Poly P组比较0 mmol/L Poly P组的I型胶原的表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]在体外Poly P可以上调大鼠肌腱干细胞基质合成基因I型胶原的表达和ATP的生成,促进肌腱干细胞的增殖。
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