多聚精氨酸蛋白转导域-凋亡素融合蛋白的原核表达及其生物活性

作者：赵健; 肖伟; 傅文彬; 高鹏; 袁勤生; 刘建文

来源：中国生物制品学杂志, 2009, (05): 448-451.

DOI：10.13200/j.cjb.2009.05.29.zhaoj.008

• 多聚精氨酸
• 蛋白转导域
• 凋亡素
• 融合蛋白
• 原核表达
• 生物活性 Poly-Arg
• Protein transduction domain(PTD)
• Apoptin
• Fusion protein
• Prokaryotic expression
• Biological activity

目的原核表达多聚精氨酸蛋白转导域-凋亡素融合蛋白,并检测其生物活性。方法应用PCR法扩增Arg9-VP3序列,与载体pET-43.1a连接后,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+-NTA纯化后,进行肠激酶裂解、超滤浓缩,并检测其生物活性。结果重组表达质粒pET-43.1a-Arg9-VP3经酶切鉴定和序列分析,证明构建正确。转化E.coliBL21(DE3)后,重组蛋白获得可溶性表达。纯化的融合蛋白纯度达90%以上,可抑制HeLa细胞增殖。结论已成功地在大肠杆菌中表达了多聚精氨酸蛋白转导域-凋亡素融合蛋白,纯化的融合蛋白具有诱导HeLa细胞凋亡的能力。

• 单位
  生物反应器工程国家重点实验室; 华东理工大学