突变型Rad50腺病毒载体的制备及其在人鼻咽癌细胞株CNE1中的最适感染量测定

作者：严睿成; 黄健聪; 朱玲; 常利红; 黎景佳; 吴喜福; 叶进; 张革化

来源：临床耳鼻咽喉头颈外科杂志, 2015, 29(24): 2143-2146.

DOI：10.13201/j.issn.1001-1781.2015.24.010

• 重组腺病毒
• 鼻咽肿瘤
• 感染倍率

目的:测定携带突变型Rad50基因的重组腺病毒载体Ad-Rad50-GFP在人鼻咽癌细胞株CNE1中的表达及其对CNE1的最适感染倍率(MOI)。方法:终点稀释法测定Ad-Rad50-GFP生物滴度,细胞生长曲线观察重组腺病毒载体对CNE1生长的影响,荧光显微镜下计算重组腺病毒载体的转染效率;免疫印迹实验检测以最适感染量感染后CNE1细胞内突变型Rad50蛋白的表达。结果:Ad-Rad50-GFP生物滴度为1.26×1011pfu/ml,重组腺病毒载体以不高于50的感染倍率转染时对CNE1生长无明显影响,且MOI=50时转染24h后GFP表达水平最高,可检出高表达的突变型Rad50蛋白,在转染72h后仍维持约70%的转染效率。结论:重组腺病毒载体Ad-Rad50-GFP能有效转染CNE1细胞并使其表达突变型Rad50蛋白,MOI=50为Ad-Rad50-GFP对CNE1的最适感染倍率。

• 单位
  广州市增城区人民医院; 中山大学附属第三医院