b型流感嗜血杆菌精制多糖分子大小分布及重均分子质量检测方法的改良

作者：李向群; 韩菲; 尹珊珊; 邓海清; 刘建凯^*; 袁波^*

来源：中国生物制品学杂志, 2021, 34(01): 97-105.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003253

• Hib精制多糖
• 相对分子大小
• 回收率
• 重均分子质量

目的改良HPLC(AKTA层析)系统,采用HPLC-MALLS系统检测b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)精制多糖的分子大小分布及重均分子质量(MW),并进行方法的验证。方法采用HPLC(AKTA层析)系统连接示差分析仪检测9批Hib精制多糖供试品的分配系数(KD)及KD值为0.5的回收率(RX)。采用HPLC连接18角度静态光散射分析系统MALLS(HPLC-MALLS)检测供试品的MW、KD及RX,并对两种系统的测试结果进行相关性分析;验证HPLC-MALLS方法的重复性、准确性及定量限。结果 9批供试品经AKTA层析系统检测,KD为0.29～0.37,RX为78%～90%;经HPLC-MALLS系统检测,KD为0.31～0.38,RX为84%～93%,MW为(1.418～2.281)×105g/moL,两种系统检测同批供试品的KD值回归方程为Y=0.903 X+0.051,r为0.978,表明检测结果具有显著相关性,两种方法等效。9批供试品经HPLC-MALLS/RI系统重复检测6次,MW、KD及RX的RSD均小于3.8%,多糖回收率及其RSD分别为80%～87%和0.05%～3.46%;定量限为1 mg/mL。结论 HPLC-MALLS系统能与HPLC系统基本对接,在准确检测Hib精制多糖MW的同时还可检测KD及RX,且方法的准确性及重复性良好,可作为检测Hib精制多糖分子大小的改良方法。

• 单位
  沈阳药科大学; 北京民海生物科技有限公司