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摘要
目的研究安氟醚对心肌缺血小鼠心肌细胞保护作用的潜在机制。方法 (1)用随机数字表法将成模后小鼠分为2组:对照组和安氟醚组,每组20只。小鼠经腹腔注射异丙肾上腺素3 mg·kg-1制备心肌缺血模型。在心脏搭桥术前,对照组小鼠用异戊巴比妥(150 mg·kg-1)麻醉,搭桥完成后腹腔注射等体积生理盐水;安氟醚组用安氟醚(1.0 mg·kg-1)麻醉,术后4 h腹腔注射(0.2 mg·kg-1)安氟醚处理;每天1次,连续3 d。用视觉模拟评分(VAS)评估小鼠术后疼痛程度。(2)处死2组小鼠后获取心肌细胞,将细胞分为2组:安氟醚组和对照组;另外,将心肌细胞分为4组:对照组(等体积PBS)、安氟醚组(安氟醚1 mg·mL-1)、安氟醚+磷酸肌醇3激酶(PIK3)抑制剂组(安氟醚+PI3K抑制剂,均1 mg·mL-1)和PI3KI抑制剂组(PI3K抑制剂1 mg·mL-1)。通过细胞计数试剂盒法检测细胞活力(光密度值),MTT法测定细胞增殖(光密度值),缺口末端标记法和流式细胞仪分别检测2组和4组的细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测免疫球蛋白结合蛋白(BIP)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT enhancer binding protein, CHOP)和PI3KI/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白表达水平。结果 (1)安氟醚组和对照组的VAS分别为(6.53±1.37)和(13.21±2.35)分,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)安氟醚组和对照组的BIP蛋白相对表达水平分别为0.23±0.03和1.04±0.12;这2组的CHOP蛋白表达分别为0.47±0.01和0.98±0.09;这2组的caspase-3蛋白表达分别为0.34±0.01和1.00±0.12;这2组的caspase-8蛋白表达分别为0.27±0.01和1.03±0.08;这2组的p-PI3K蛋白表达分别为1.53±0.16和0.98±0.08;这2组的p-Akt蛋白表达分别为1.69±0.19和0.99±0.11;这2组的心肌细胞存活率分别为(0.87±0.12)%和(0.62±0.03)%;这2组的细胞凋亡率分别为(0.33±0.01)%和(1.08±0.09)%,安氟醚组与对照组比较,上述指标差异均有统计学意义(均P<0.05)。安氟醚+PI3K抑制剂组和对照组的细胞存活率分别为(0.91±0.05)%和(0.98±0.06)%;这2组心肌细胞凋亡率分别为(1.12±0.12)%和(1.02±0.09)%;安氟醚+PI3K抑制剂组与对照组比较,上述指标的差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论安氟醚有助于减轻心脏手术中小鼠的疼痛并通过PI3K/Akt信号通路抑制心肌细胞的凋亡。
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单位泰达国际心血管病医院; 哈尔滨医科大学; 基础医学院
