牛呼吸道合胞体病毒G蛋白抗原区原核表达及反应原性鉴定

作者：武春霞; 周雅坪; 郭婷; 崔琦; 王宇琛; 田广原; 思汗; 孙衍立; 郝永清^*

来源：中国畜牧兽医, 2021, 48(09): 3438-3446.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2021.09.036

• 牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)
• G蛋白
• 原核表达
• 可溶性表达
• 反应原性

本研究旨在获得重组牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白并对其进行反应原性鉴定。从NCBI上找出G基因的核苷酸序列,分析其抗原区域,利用Primer Premier 5.0软件设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增BRSV G基因片段,将目的片段连接到克隆载体pMD19-T后,对其进行双酶切鉴定和测序。将双酶切后的目的片段进行胶回收,构建重组质粒pET-32a-G,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用Ni-IDA亲和层析法纯化经IPTG诱导表达的蛋白,并测定其浓度;通过SDS-PAGE和Western blotting方法对该蛋白进行分析与鉴定。结果显示,本试验成功克隆出大小约为567 bp的G基因,获得分子质量约为40 ku的可溶性重组蛋白,优化诱导条件后用SDS-PAGE对表达产物进行鉴定,在16℃、IPTG浓度1.2 mmol/L、诱导4 h时蛋白表达量最大;通过Western blotting检测发现,重组蛋白可与山羊源BRSV标准阳性血清发生特异性反应,说明该蛋白具有反应原性。综上,本研究成功表达并纯化了BRSV G蛋白,为建立BRSV抗体间接ELISA检测方法和BRSV亚单位疫苗的研制奠定了基础。

• 单位
  内蒙古农业大学; 呼伦贝尔市动物疫病预防控制中心