重组蛋白PTD-HSP27的制备及其穿细胞膜和角膜组织的功能研究

作者：刘莲; 余榕捷; 戴云; 曾智星; 郭晓令; 季青山; 钟敬祥

来源：中国病理生理杂志, 2015, 31(01): 135-140.

DOI：10.3969/j.issn.1000-4718.2015.01.026

• 蛋白转导域
• 热休克蛋白27
• 反式转录激活因子
• 晶状体上皮细胞

目的:制备PTD-HSP27蛋白并研究其能否穿过人晶状体上皮细胞SRA01/04细胞膜及新西兰大白兔的角膜组织进入眼前房。方法:利用重叠延伸PCR法获得重组目的基因片段PTD-HSPB1-6His,构建重组质粒p KYB-PTD-HSP27-6His,原核诱导PTD-HSP27蛋白表达及纯化重组蛋白后对其进行Western blotting鉴定;用异硫氰酸荧光素(FITC)标记重组蛋白PTD-HSP27并检测其穿透SRA01/04细胞膜的能力及兔眼角膜组织的能力。结果:成功构建并纯化制备目的蛋白PTD-HSP27,在PTD-HSP27孵育后的SRA01/04细胞及结膜囊滴注PTDHSP27兔眼前房内均可检测出重组蛋白PTD-HSP27。结论:通过重叠延伸PCR法及镍柱层析纯化法可以获得较纯的重组蛋白PTD-HSP27;重组蛋白PTD-HSP27能够穿透SRA01/04细胞膜及穿越兔眼角膜进入房水。

• 单位
  暨南大学附属第一医院; 暨南大学