PRRSV类NADC30毒株免提取核酸荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作者：于新友; 李天芝; 肖跃强^*; 沈志强

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (14): 74-83.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.07.0243

• 猪繁殖与呼吸综合征病毒
• 类NADC30毒株
• 免提取核酸
• 荧光定量RT-PCR
• 敏感性

为了建立简便、快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)类NADC30毒株免提取核酸荧光定量RT-PCR方法，试验根据GenBank中PRRSV类NADC30毒株NSP2基因设计引物和探针，建立了直接对样品中PRRSV类NADC30毒株检测的荧光定量RT-PCR方法。对该方法的敏感性、特异性和重复性进行评估，并对临床样本进行检测。结果表明：建立的PRRSV类NADC30毒株免提取核酸荧光定量RT-PCR方法的扩增体系(20μL)为2×PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix 10μL,PRRSV类NADC30毒株液1μL,NADC30-F(15μmol/μL)0.8μL,NADC30-R(15μmol/μL)0.8μL,NADC30-P(15μmol/μL)0.4μL,灭菌纯化水7μL。扩增程序为90℃3 min; 60℃5 min; 95℃5 s, 54℃20 s (收集荧光信号，选择FAM通道),40个循环。该法特异性好，对其他猪常见病原无交叉反应。对PRRSV类NADC30毒株液的最低检测限度为3.98 TCID50/100μL,与传统提取核酸的荧光定量RT-PCR检测方法敏感性一致。不同病毒含量样本组内和组间变异系数均不高于2%,具有良好的重复性和稳定性。临床样本检测结果与传统荧光定量RT-PCR方法检测结果一致。说明建立的PRRSV类NADC30毒株免提取核酸荧光定量RT-PCR检测方法特异性好、敏感性高，具有良好的重复性和稳定性，可用于PRRSV类NADC30毒株的临床检测。

• 单位
  山东省滨州畜牧兽医研究院