本发明公开了一种双氧水耐受的脂肪酶突变体及其应用,属于生物技术领域,本发明基于酶蛋白结构分析,设计及构建酶突变库,筛选获得对双氧水耐受性增强的脂肪酶突变体,并构建得到高效表达该突变体的毕赤酵母工程菌,该双氧水耐受性增强的脂肪酶突变体,相对于野生型耐受双氧水的能力显著增强,在1M的双氧水中处理24h,其残余活力仍保留是78%,约是野生型的4倍,该突变体可在废纸脱墨的加工过程中应用,具有良好的稳定性能,可在应用过程中寿命延长,节约生产成本和提高生产效率。