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摘要
目的 建立去除无细胞百日咳疫苗丝状血凝素（filamentous hemagglutinin,FHA）纯化液中内毒素的TritonX-114液相分离法，并评价其效果。方法 以影响TritonX-114液相分离法效果的TritonX-114加入量、4℃混匀时间、37℃分层时间、25℃16 743×g离心时间为试验因素，每个因素设计3个水平，通过正交试验设计12组试验。每组试验获得的样品均检测蛋白回收率，以蛋白回收率最高的条件为最佳。采用最佳条件去除3批无细胞百日咳疫苗FHA纯化液内毒素，检测FHA蛋白含量、内毒素含量及TritonX-114残留量。结果 TritonX-114液相分离法最佳条件：TritonX-114加入量为1%,4℃混匀时间为30 min,37℃分层时间为60 min,25℃167 43×g离心时间为10 min。最佳条件下去除3批无细胞百日咳疫苗FHA纯化液内毒素后，内毒素含量均<0.25 EU/mL,TritonX-114残留量均值为0.183%，蛋白回收率均值为91.04%。结论 TritonX-114液相分离法能够有效去除无细胞百日咳疫苗FHA纯化液中的内毒素，且方法耗时短，操作简便。
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