褪黑素对水貂GV期卵母细胞冷冻保存效率的影响

作者：曹俊国; 李文; 韩玉萍; 杨镒峰; 魏海军^*; 许保增^*

来源：中国兽医学报, 2020, 40(04): 816-822.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.04.26

• 褪黑素
• 水貂
• 卵母细胞
• 玻璃化冷冻

旨在探究水貂生发泡期(GV期)卵丘-卵母细胞复合体(COCs)玻璃化冷冻、解冻及培养过程中添加褪黑素(melatonin,MT)对水貂卵母细胞解冻后存活率、体外培养COCs恢复减数分裂比例(GVBD率)、体外培养卵母细胞活性线粒体的分布以及体外培养COCs颗粒细胞糖酵解相关基因表达(卵母细胞与颗粒细胞缝隙连接好坏的标志分子)的影响。试验分为3组:无冷冻处理的对照组(C组)、冷冻组(V组)和添加MT(10-9 mol/L)的冷冻处理组(MT组)。结果显示:MT组卵母细胞在解冻后3 h的存活率(91%±4.8%,n=91)与V组的存活率(90%±2.7%,n=75)差异不显著(P>0.05),但两组存活率显著低于C组(100%,n=80)(P<0.05);C组(81%±1.9%,n=64)和MT组卵母细胞的GVBD率(70%±2.7%,n=80)显著高于V组(55%±4.1%,n=80)(P<0.05),但C组与MT组相比差异不显著(P>0.05);免疫荧光结果显示,MT组的卵母细胞线粒体正常分布率(34%±3.8%,n=75)与V组(30%±2.3%,n=60)相比差异不显著(P>0.05),但MT和V组的卵母细胞线粒体正常分布率显著低于C组(79%±3.4%,n=90)(P<0.05);qRT-PCR结果显示,MT组颗粒细胞糖酵解基因Ldh1、Pkm2及Pfkp的表达量显著高于V组(P<0.05),但前两者糖酵解基因的表达量显著低于C组(P<0.05)。结果表明,添加MT可以提高冻融后水貂卵母细胞的GVBD率,降低冷冻对卵母细胞和颗粒细胞连接的冷冻损失,但要建立一个高效的水貂GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存体系仍需进一步研究。

• 单位
  中国农业科学院特产研究所