花鲈肠上皮细胞原代培养及鉴定方法的探讨研究

作者：李莎; 刘紫严; 杨红玲; 蔡国鹤; 聂庆杰; 张春晓; 孙云章^*

来源：水产科学, 2023, 1-12.

DOI：10.16378/j.cnki.1003-1111.23004

• 花鲈
• 肠上皮细胞
• 原代培养
• 组织块法
• 酶消化法

为探究建立稳定可靠的花鲈肠上皮细胞原代培养方法，通过组织块法和酶消化法培养花鲈肠上皮细胞，确定了酶消化法的最佳消化液及消化时间，所得细胞悬液于L-15培养液中进行培养。利用形态学观察、透射电镜观察和碱性磷酸酶染色方法对细胞进行鉴定。结果显示，组织块法细胞迁出情况不稳定，且迁出时间较长；酶消化法的最佳消化液为胶原酶Ⅰ、Ⅳ联合消化液，最佳消化时间为45 min；胶原酶Ⅰ、Ⅳ联合消化法获得的细胞连接紧密、排列整齐、呈上皮细胞典型的“铺路石”状，细胞相对独立、界限清晰。透射电镜观察和碱性磷酸酶染色进一步证实所培养的细胞为肠上皮细胞。总之，经胶原酶Ⅰ、Ⅳ联合消化液消化45 min，培养48 h可得到初始条件一致、生长旺盛的花鲈原代肠上皮细胞。

• 单位
  集美大学