Klebsiella sp.GXK-1的α-L-鼠李糖苷酶的酶学性质

作者：郭双双; 兰青; 何贺贺; 郑芳芳; 王子龙; 韦宇拓; 黄日波; 杜丽琴

来源：广西科学, 2018, 25(03): 290-343.

DOI：10.13656/j.cnki.gxkx.20180604.001

• 克雷伯氏菌
• α-L-鼠李糖苷酶
• 克隆表达
• 酶学性质

【目的】克隆、表达克雷伯氏菌Klebsiellasp.GXK-1菌株中的α-L-鼠李糖苷酶基因,并研究重组酶的酶学性质。【方法】比对分析GenBank数据库中克雷伯氏菌同属的α-L-鼠李糖苷酶基因序列,设计简并引物PCR扩增基因的保守区。扩增目的基因,以pSE380为表达载体构建重组质粒pSE-rha1,并在大肠杆菌E.coli XL-blue进行诱导表达,使用镍亲和层析纯化重组蛋白,研究目的蛋白RHA1的酶学性质。【结果】以pNPR为底物,进行重组酶酶学性质的研究。重组酶RHA1的最适pH值和最适温度分别为5.0和45℃,Km值为(0.223±0.030)mmol/L,Vmax值为(1.272±0.121)μmol/(min·mg)。在pH值为610的缓冲液内酶活力仍保持在80%以上;在温度为40℃以下时,酶活较为稳定,但在温度高于40℃时酶活力迅速下降。RHA1能水解pNPR、橙皮苷和芦丁。【结论】RHA1具有良好的pH稳定性,不仅能够水解人工底物pNPR,还能够水解α-1,6键的天然底物橙皮苷和芦丁,具有一定的医疗应用价值。

• 单位
  亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室