猪伪狂犬病病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立

作者：**芸; 国师榜; 周宁; 华琳; 陈焕春; 吴斌^*

来源：中国兽医学报, 2019, 39(09): 1667-1673.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.09.03

• 伪狂犬病病毒
• gE基因
• TaqMan实时荧光定量PCR

针对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守区的核苷酸序列设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV野毒的TaqMan实时荧光定量PCR方法。应用该方法检测猪常见病毒性病原(猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型),PRV gE基因缺失株,以及健康猪的组织,结果均为阴性,证明该方法特异性良好。该检测方法能够检到的阳性质粒模板最低浓度为254 copies/μL,最低病毒浓度为4.22 TCID50/100μL,比常规PCR敏感性高10倍;重复性试验结果表明该方法重复性良好;用TaqMan实时荧光定量PCR方法和常规PCR方法同时检测37份临床样品,其中前者检出阳性病料22份,阳性检出率为59.64%,后者检出阳性病料15份,阳性检出率为40.54%,2种方法的符合率为81.08%。综上所述,该方法的建立为PRV的实验室诊断及流行病学调查提供了快速、准确的检测手段。

• 单位
  农业微生物学国家重点实验室; 华中农业大学