花椒几丁质酶基因ZaCHIT1的原核表达及纯化

作者：杨德奕; 毛俊文; 赵德刚; 赵懿琛^*

来源：种子, 2021, 40(12): 19-25.

DOI：10.16590/j.cnki.1001-4705.2021.12.019

• 花椒
• 几丁质酶
• 原核表达
• 可溶性蛋白

花椒中含有的几丁质酶基因ZaCHIT1在植物病程中诱导相关蛋白表达，在植物对抗真菌病害过程中起重要作用。本研究将原核表达载体pMCSG19-ZaCHIT1转化到大肠杆菌BL 21(DE 3)菌株中，之后进行IPTG诱导表达并从诱导温度、时长和IPTG浓度3个方面检测对ZaCHIT 1重组蛋白表达的影响，以获得最优体系，最优体系为诱导温度37℃、IPTG浓度为1 mmol·L-1、诱导时长为14 h。进一步离心后分析各组分发现，ZaCHIT 1重组蛋白多以可溶性蛋白形式存在。利用Ni-NTA亲和层析纯化方法对ZaCHIT 1重组蛋白进行纯化，发现在经过300 mmol·L-1咪唑洗脱液洗脱后的洗脱组分中的ZaCHIT 1重组蛋白表达浓度最大。经Western Blot鉴定发现，在77.51 kDa处有符合ZaCHIT 1重组蛋白大小的特异性条带出现。本研究将为后续研究ZaCHIT1基因在植物中的抗菌作用机制及结构提供依据。

• 单位
  贵州大学; 生命科学学院