p53/p21信号转导通路在石英诱导人胚肺成纤维细胞恶性转化中的作用

作者：钱源源; 张璘; 朱钰玲; 张文翠; 牛勇; 刘凯; 叶萌^*

来源：卫生研究, 2019, 48(02): 187-192.

DOI：10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2019.02.002

• p53
• p21
• 石英
• 恶性转化
• 人胚肺成纤维细胞
• 矽肺

目的观察石英诱导恶性转化的人胚肺成纤维细胞(T-HELF)中p53蛋白的表达量,并探讨p53蛋白对p21、细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)蛋白表达量及蛋白间相互作用的影响。方法利用胞浆胞核分离技术,分别提取人胚肺成纤维细胞(HELF)、T-HELF胞浆和胞核蛋白,运用Western blot检测p53、磷酸化p53及p21蛋白在细胞中的表达量及分布。利用RNA干扰技术,在T-HELF中转染2μg p53 siRNA,同时设立转染CMV-neo空白载体质粒的对照组,观察p53、磷酸化p53、p21、细胞周期蛋白D1和CDK4的蛋白表达量及改变。用免疫沉淀方法检测HELF和T-HELF中p21、细胞周期蛋白D1及CDK4蛋白结合物水平的变化,并在T-HELF中分别加入20μmol/L p53化学抑制剂pifithrin-α(PFT-α)和2μg p53转染质粒,观察其对p21、细胞周期蛋白D1及CDK4蛋白间相互作用的影响。结果石英刺激HELF可引起胞核中p53及磷酸化p53蛋白表达量显著增高(P<0.05),T-HELF胞核中p53的蛋白表达量较HELF显著降低(P<0.05)。转染p53 siRNA后,p53蛋白与对照组相比表达下降,p21及细胞周期蛋白D1蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05),尚未观察到CDK4蛋白表达量的变化(P>0.05)。免疫沉淀结果显示抑制p53的表达可下调p21与细胞周期蛋白D1蛋白复合物的表达量(P<0.05),但尚未观察到其对p21、细胞周期蛋白D1与CDK4蛋白结合的影响(P>0.05)。结论 p53可通过调控p21、细胞周期蛋白D1的蛋白表达和蛋白间相互作用参与石英诱导的恶性转化过程。

• 单位
  中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所