草生欧文氏菌中酪氨酸酚裂解酶的体外定向进化及结构模拟

作者：郭小雷

来源：化学与生物工程, 2023, 40(07): 34-44.

• 易错PCR
• 定向进化
• 草生欧文氏菌
• 酪氨酸酚裂解酶
• L-酪氨酸

以来源于草生欧文氏菌(Erwinia herbicola)的酪氨酸酚裂解酶(Eh-TPL)为目的基因，通过易错PCR定向进化技术构建突变体文库，利用高通量筛选方法获得了比酶活提高的突变体S20C和E202R,再通过定点突变得到突变体S20C/E202R/N161S。经摇瓶发酵培养发现，突变体S20C/E202R/N161S比野生型Eh-TPL的比酶活提高了30.61%;酶学性质研究结果表明，突变体S20C/E202R/N161S的最适温度仍为37℃,最适pH值从8.2升至8.5,热稳定性、pH稳定性均得到明显提高；结构模拟结果表明，突变体S20C/E202R/N161S的三维结构无明显变化，突变位点附近氢键和表面电势有所变化。体外定向进化技术能有效提高Eh-TPL的催化效率，对酶法生产L-酪氨酸具有重要应用价值。