2型登革病毒非结构蛋白NS3的表达及其相互作用蛋白的纯化

作者：翁代慧; 雷迎峰; 董阳超; 韩佩君; 叶传涛; 杨敬; 王媛; 尹文

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2015, 31(12): 1588-1592.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.007576

• 登革病毒
• NS3
• 串联亲和纯化

目的构建2型登革病毒(DENV2)非结构蛋白3(NS3)与亲和标签融合蛋白的表达质粒,串联亲和纯化(TAP)法获得与NS3相互作用的蛋白。方法根据DENV2基因序列,设计引物;以DENV2 c DNA为模板,PCR扩增出NS3基因,经酶切后克隆至含有串联亲和标签(FLAG-StrepⅡ)的哺乳真核表达载体p CI-SF,获得重组表达质粒p CI-NS3-SF;将上述重组质粒通过转染试剂LipofectamineTM2000瞬时转染进入HEK293T细胞,Western blot法验证NS3融合蛋白的表达;通过TAP法分离纯化与NS3相互作用的蛋白。结果成功构建了NS3融合蛋白表达载体,利用TAP系统分离得到与NS3蛋白相互作用的宿主蛋白。结论串联亲和纯化法可以有效的分离与DENV2 NS3相互作用的细胞蛋白。

• 单位
  中国人民解放军第二炮兵总医院; 西京医院输血科; 第四军医大学