雌激素相关受体α对沉默重组腺病毒载体转染MG63细胞和骨相关蛋白的影响

作者：刘少津; 万雷^*; 乔荣勤; 黄宏兴; 柴爽

来源：医学研究生学报, 2018, 31(09): 904-909.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2018.09.002

• 雌激素受体相关受体α
• DKK1
• 骨硬化蛋白
• 成骨细胞
• 腺病毒

目的雌激素相关受体α(ERRα)可调节成骨细胞的功能活动。文章研究ERRα对Wnt信号通路抑制因子DKK1、骨硬化蛋白Sost腺病毒载体转染人成骨肉瘤细胞(MG63)和相关蛋白的影响。方法将培养好的MG63细胞用包装好的沉默DKK1、沉默Sost腺病毒载体转染后分为空白对照组、沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默(DKK1+Sost)组;再用过表达ERRα干预上述转染的各组MG63细胞,将细胞分为ERRα干预空载腺病毒组、ERRα干预沉默DKK1组、ERRα干预沉默Sost组、ERRα干预沉默(DKK1+Sost)组,应用MTT法检测MG63细胞的活性,碱性磷酸酶试剂盒检测ALP的活性,流式分析MG63细胞的Ca2+浓度;Western blot检测低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、骨桥蛋白(OPN)、骨保护蛋白(OPG)的表达。结果空白对照组、沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默(DKK1+Sost)组、ERRα干预空载腺病毒组、ERRα干预沉默DKK1组、ERRα干预沉默Sost组、ERRα干预沉默(DKK1+Sost)组细胞活性分别为(100.00±5.61)%、(118.89±4.72)%、(123.31±8.17)%、(139.72±9.18)%、(100.00±7.17)%、(131.07±8.17)%、(125.29±9.46)%、(145.98±6.51)%,ALP活性分别为(5.89±0.12)、(6.69±0.23)、(8.92±0.37)、(9.47±0.31)、(7.10±0.38)、(7.82±0.21)、(8.02±0.26)、(9.82±0.21)U/μL,Ca2+浓度分别为(123.48±2.95)、(77.81±7.06)、(64.22±7.67)、(50.81±4.76)、(80.02±14.50)、(38.06±7.66)、(26.72±6.54)、(12.92±2.75)nmol/L。沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默(DKK1+Sost)组较空白对照组MG63细胞活性和ALP活性升高,Ca2+浓度降低(P<0.05);而ERRα干预空载腺病毒组较空白对照组ALP活性提高,Ca2+浓度降低(P<0.05)。ERRα干预沉默DKK1组较沉默DKK1组细胞,ERRα干预沉默(DKK1+Sost)组较沉默(DKK1+Sost)组MG63细胞活性和ALP活性升高,Ca2+浓度降低(P<0.05);ERRα干预沉默Sost组较沉默Sost组MG63细胞活性升高,Ca2+浓度降低(P<0.05)。与空白对照组对比,沉默Sost组、沉默(DKK1+Sost)组MG63中LRP5、BMP2、OPN、OPG蛋白表达升高(P<0.05);沉默DKK1组MG63中LRP5、OPG蛋白的表达亦升高(P<0.05)。ERRα干预沉默DKK1组较沉默DKK1组细胞,ERRα干预沉默(DKK1+Sost)组较沉默(DKK1+Sost)组MG63中LRP5、BMP2、OPN、OPG蛋白的表达升高(P<0.05);ERRα干预沉默Sost组较沉默Sost组LRP5、BMP2、OPG蛋白亦升高(P<0.05)。结论 ERRα可调节骨LRP5、BMP2、OPN、OPG蛋白来促进骨形成和抑制骨吸收。

• 单位
  广州中医药大学第三附属医院; 广州中医药大学