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摘要
目的 克隆S100A4 cDNA,构建pcDNA3.1-S100A4重组表达载体，转染胃癌细胞系MKN1,观察S100A4在胃癌细胞中的表达情况。方法 Trizol法提取人胃上皮细胞GES-1的总RNA,逆转录反应获得含S100A4基因的cDNA。聚合酶链反应GenBank获得S100A4基因序列，并设计引物，利用聚合酶链反应(PCR)扩增出分子量为327 bp的产物。构建pMD18-T simple-S100A4重组质粒，转化JM109菌。菌液测序成功后，提取质粒，进行BamHⅠ/HindⅢ双酶切，酶切产物回收纯化，连接表达载体pcDNA3.1,构建pcDNA3.1-S100A4真核表达载体。利用脂质体介导转染方法将纯化的表达载体转染到胃癌细胞系MKN1中，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后MKN1细胞中S100A4 mRNA表达水平。结果 PCR产物连接克隆载体的测序结果与GenBank公布的无突变序列一致，HindⅢ/BamHⅠ双酶切可以成功构建真核表达载体pcDNA3.1-S100A4;在胃癌细胞系MKN1中转染pcDNA3.1-S100A4表达载体，以转染pcDNA3.1空载体和正常未转染的MKN1细胞作为对照。结果表明，转染pcDNA3.1-S100A4表达载体48 h后，S100A4 mRNA表达水平升高，差异有统计学意义(P<0.01)。结论 构建完成pcDNA3.1-S100A4真核表达载体，S100A4基因在胃癌细胞MKN1中成功表达。
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