密苏里游动放线菌葡萄糖异构酶基因xylA的克隆及其表达条件的优化

作者：王贺; 杨瑞金; 华霄; 钱婷婷; 张文斌; 蒋孝燕

来源：食品科学, 2010, 31(15): 171-176.

• 密苏里游动放线菌
• 葡萄糖异构酶
• 表达
• Slowdown PCR

为克隆、表达密苏里游动放线菌葡萄糖异构酶(GI)基因xylA,并对其诱导表达条件进行初步优化。采用Slowdown PCR方法克隆得到密苏里游动放线菌(Actinoplanes missouriensis)CICIM B0118(A)的葡萄糖异构酶基因xylA,构建pET-28a(+)-xylA表达载体,并转化至E.coliBL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并对其表达产物进行SDS-PAGE电泳。结果表明,融合蛋白分子质量约为45kD。在诱导时间9h、0.6mmol/LIPTG、30℃和OD600nm值为0.8的最适培养条件下,酶比活力最高达到62.42U/mL。

• 单位
  食品科学与技术国家重点实验室; 江南大学