新型冠状病毒N蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

作者：宋桃花; 高岩; 陈柯; 郑皖怿; 付玉荣; 伊正君^*

来源：中国病原生物学杂志, 2021, 16(12): 1373-1376.

DOI：10.13350/j.cjpb.211203

• 新型冠状病毒
• N蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体

目的 利用原核表达系统获得新型冠状病毒(SARS-CoV-2)N蛋白，将目的蛋白纯化后制备兔抗N蛋白多克隆抗体。方法 对PET28a-2019-EnCoV-N重组质粒进行酶切和测序鉴定后转化E.coli BL21(DE3),筛选阳性重组菌，优化SARS-CoV-2 N重组蛋白表达条件，并对目的蛋白进行纯化，通过SDS-PAGE及Western blot对N蛋白进行鉴定。用纯化的N蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体，利用间接ELISA、Western blot检测多克隆抗体的效价和特异性。结果 酶切和测序表明，PET28a-2019-EnCoV-N重组质粒构建成功，经诱导在E.coli BL21(DE3)中成功表达约50 ku的SARS-CoV-2 N蛋白，该蛋白主要以可溶形式存在。用纯化的N蛋白免疫新西兰大白兔，获得高水平抗体血清，抗体效价达1∶128 000以上，Western blot检测多克隆抗体与N蛋白具有良好的反应性。结论 获得了免疫原性较强的N蛋白及具有特异性的兔抗N蛋白多克隆抗体，为研究N蛋白在新型冠状病毒感染中的作用及新型冠状病毒肺炎的诊断奠定了基础。

• 单位
  基础医学院; 潍坊医学院