KRAS对T-ALL细胞株增殖及凋亡的影响

作者：柳梓杨; 舒逸; 傅国; 苏虹宇; 朱丹; 曾腊梅; 马德禹; 邹琳^*

来源：中国实验血液学杂志, 2022, 30(04): 1040-1048.

DOI：10.19746/j.cnki.issn1009-2137.2022.04.011

• RAS
• 急性T淋巴细胞白血病
• 细胞增殖
• 细胞凋亡

目的：探讨RAS蛋白家族在维持T-ALL细胞株体外生长中的功能。方法：纯化T-ALL细胞株DNA，利用PCR法扩增3个RAS基因（KRAS、NRAS、HRAS）的编码区。经T-A克隆后，Sanger法对KRAS、NRAS、HRAS基因编码区测序。将siRNA克隆到pSEH-361载体，在HEK-293T细胞中与pAMPHO和pVSVG一起包装成逆转录病毒，随后感染T-ALL细胞。qRT-PCR和Western blot检测基因表达情况。利用Annexin V-PE/7-AAD染色T-ALL细胞，流式细胞术检测细胞凋亡情况。利用Hoechst 33258染色T-ALL细胞，流式细胞术检测细胞周期分布情况。经抗体染色，荧光显微镜观察cleaved-Caspase 3蛋白的表达。结果：在T-ALL细胞株中，除Loucy和P12-ICH细胞KRAS基因发生c. 6187G> A(p. KRASG12D)突变，其余RAS基因均未发现错义突变。除PEER细胞（IC50=47.916μmol/L）外，泛RAS抑制剂Compound 3144对其它T-ALL细胞均有一定杀伤作用。同样，除PEER细胞（IC50=94.2265μmol/L）外，Tipifarnib可诱导多种T-ALL细胞凋亡。抑制KRAS表达后，T-ALL细胞凋亡明显，细胞周期阻滞。结论：KRAS蛋白维持T-ALL细胞株体外生长，是治疗T-ALL的潜在药物靶点。

• 单位
  上海交通大学; 重庆医科大学附属儿童医院