微丝相关蛋白hHBRK1突变体的构建、表达及纯化

作者：雷呈祥; 隋建丽; 白贝; 颜贤忠; 徐勤枝; 周平坤

来源：军事医学科学院院刊, 2005, (06): 528-530+553.

DOI：10.3969/j.issn.1674-9960.2005.06.009

• hHBRK1
• 肌动蛋白类
• 基因突变
• 融合蛋白
• 微丝蛋白质类
• 聚合酶链反应

目的:构建微丝相关蛋白hHBRK1截短体和突变体原核表达载体,并表达及纯化融合蛋白。方法:采用常规PCR并结合定点突变技术,对hHB rk1基因进行缺失和点突变;利用限制性内切酶将PCR产物克隆至原核表达载体pGEX-4T;IPTG诱导融合蛋白表达,通过谷胱甘肽-琼脂糖纯化技术分离纯化GST融合蛋白。结果与结论:构建了包括氨基端缺失截短体hHBRK1-ΔN、羧基端缺失截短体hHBRK1-ΔC和点突变蛋白hHBRK1-S56G57在内的原核表达质粒,分离获得较高纯度的重组hHBRK1突变体融合蛋白,W estern杂交证实纯化蛋白为GST融合蛋白。本实验为进一步研究hHBRK1的相互作用蛋白及其可能的结合位点提供了基础。

• 单位
  军事医学科学院; 军事医学科学院放射与辐射医学研究所; 中国人民解放军海军医学研究所