登革病毒感染诱导肠黏膜屏障功能损伤的初步研究

作者：陈炜; 徐小峰; 田衍平; 王嘉丽; 张俊磊

来源：中华医院感染学杂志, 2019, 29(20): 3050-3055.

• 登革病毒
• 登革出血热/登革休克综合征
• 肠黏膜屏障
• RhoA/ROCK
• 内毒素
• 白细胞介素-6
• 白细胞介素-8

目的对登革病毒感染诱导肠黏膜屏障功能损伤进行初步的研究,为阐明登革出血热/登革休克综合征(DHF/DSS)的发病机制提供理论依据。方法采用登革2型病毒(Dengue virus 2,DV2)感染RhoA突变体稳定表达细胞株,运用病毒噬斑计数法观察其对DV感染的影响。基于体外HMEC-CaCO2细胞共培养模型,观察DV感染导致肠上皮细胞屏障功能损伤和紧密连接蛋白分布和网络结构的变化情况。运用酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction, PCR)法观察在DV感染条件下协同脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激对血管内皮细胞分泌白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)和IL-6的影响。结果干扰RhoA/ROCK的活性会抑制DV的复制增殖,ECVWtRhoA、ECVV14RhoA和ECVN19RhoA培养上清和细胞内的病毒滴度均低于ECV304N,分别下降了88.40%、51.17%、25.33%和35.83%、15.21%、10.63%。HMEC感染DV后与CaCO2细胞共培养1天后与对照组相比跨上皮电阻(Trans-epithelial resistance, TER)下调了(27.00±4.55)Ω/cm2(P=0.002),2天后跨上皮电阻下调了(40.33±0.12)Ω/cm2(P<0.0001)。同时,CaCO2细胞紧密连接蛋白ZO-1、occludin的分布发生改变,紧密连接网络受到破坏,肠上皮细胞层通透性增高。此外,在DV感染条件下协同LPS刺激与单独感染组相比可进一步促进血管内皮细胞分泌IL-8和IL-6(P<0.001)。结论 DV感染血管内皮细胞可能在RhoA/ROCK通路活化和其他因素的共同参与下诱发肠黏膜屏障功能损伤和肠道细菌移位,由此启动的LPS对血管内皮的持续刺激可能成为血管内皮损伤和血浆渗漏发生的"加速器",推动DHF/DSS病程发展,但其机制仍需进一步证实。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 基础医学院