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摘要
目的 建立一类荧光重组酶聚合酶（recombinase polymerase amplification, RPA）扩增的田鼠巴贝虫快速检测方法并对该方法进行评价。方法 选择细胞色素B基因为靶序列，设计3组引物及荧光探针建立田鼠巴贝虫的检测方法并优化引物。设置37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃等6个温度梯度进行反应温度条件优化。将基因组DNA稀释至1 ng/μL、100 pg/μL、10 pg/μL、1 pg/μL、100 fg/μL、10 fg/μL、1 fg/μL等7个浓度梯度进行该方法的敏感性评价，采集恶性疟及间日疟患者血液样本进行特异性评价。取445 200、89 040、17 808、3 561.6、712.32、142.46、28.49、5.7、1.14、0.23不同田鼠巴贝虫载量的样本进行虫密度最低检测限实验。选取16例临床发热患者的血液样本进行荧光RPA与巢式PCR检测，评价结果一致性。结果 建立的荧光RPA法可特异扩增出150 bp的田鼠巴贝虫目的片段，最佳反应温度为39℃。该方法针对基因组DNA的检测敏感性最低可达10 fg/μL，不同田鼠巴贝虫密度样本的最低检测限量为0.23个/μL。该方法在对恶性疟、间日疟患者血液样本的检测中均未出现交叉反应。荧光RPA与巢式PCR各检测16例临床发热患者血液样本，均检出9例田鼠巴贝虫阳性，7例田鼠巴贝虫阴性，结果一致。结论 荧光重组酶聚合酶扩增检测田鼠巴贝虫方法敏感性强、特异性好，有望应用于巴贝虫感染的快速检测及风险监测。
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单位上海交通大学; 河南省疾病预防控制中心; 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所
