重组猪瘟病毒E2基因逆转录病毒载体的构建及其表达活性

作者：田宏; 刘湘涛; 林彤; 吴锦艳; 龚真莉; 郑海学; 代兴国; 孙世琪; 尚佑军; 谢庆阁; 张彦明

来源：中国兽医学报, 2007, (04): 460-463.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2007.04.015

• 猪瘟C株E2基因
• 重组逆转录病毒载体
• PK15细胞
• 基因表达 CSFV E2 gene
• retroviral vector
• PK15 cell
• gene expression.

从实验感染兔脾组织中提取总RNA,应用RT-PCR得到了CSFV C-株结构蛋白E2基因,定向克隆于逆转录病毒载体pBABEpuro,经PCR、酶切和序列分析鉴定,获取阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,并在Polybrene的介导下感染PK15细胞,嘌呤霉素筛选表达猪瘟E2基因的细胞株。通过细胞传代并结合PCR、免疫荧光及ELISA检测表明,所筛的细胞细胞系能稳定表达猪瘟E2基因,而且表达产物具有良好的生物学活性。

• 单位
  农业部; 动物科技学院; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 西北农林科技大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所