血清过氧化氢酶活度臧红T荧光猝灭检测方法的建立及优化

作者：张爱菊; 白莹; 薛林科; 戴兴德; 张小林; 董娜^*

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(08): 986-991.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003677

• 过氧化氢酶
• 活度
• 臧红T
• 荧光猝灭法

目的 建立血清过氧化氢酶(catalase,CAT)活度臧红T(safranine T,ST)荧光猝灭检测方法，并进行优化。方法 建立的方法分为酶促反应和荧光猝灭反应2个阶段，对荧光猝灭反应的催化剂(Fe3+和Fe2+)及其用量(0.00～1.20 m L)、ST用量(0～6 mL)、硫酸用量(0～6 mL)、荧光猝灭时间(2.5～60.0 min)及酶促反应的H2O2用量(0.00～3.00 mL)、酶促反应时间(0～30 min)进行优化。同时确定方法的线性范围，进行干扰试验，并验证准确性。结果 最佳检测条件：催化剂为Fe2+,Fe2+用量为0.80 mL,ST用量为3.00 mL，荧光猝灭反应不需加入硫酸(pH范围为4.11～4.82)，荧光猝灭时间为15 min;H2O2用量为1.00 mL，酶促反应时间为10 min。CAT活度在5×10-5～0.02 U/mL范围内，与△F呈良好的线性关系，线性方程为y=180 7 x+0.752 7,r=0.998 0；检测限为3.81×10-5U/mL；检测体系中存在1×10-5mol/L的Vc、葡萄糖、果糖、乳糖、半乳糖时测定误差<5%;6份血清加标样品回收率为98.0%～102.0%。结论 建立的CAT活度ST荧光猝灭检测方法具有良好的准确性及较低的检测限，可用于临床人血清中CAT活度的检测。

• 单位
  甘肃医学院