腺嘌呤加高磷饮食快速建立慢性肾脏病血管钙化动物模型法

作者：蒲江; 魏晓; 龚财判; 刘琦; 张丽玲; 李丽; 欧三桃

来源：西南军医, 2018, 20(04): 445-450.

• 慢性肾脏病
• 血管钙化
• 高磷饮食
• 腺嘌呤

目的建立一种快速诱导慢性肾脏病(CKD)血管钙化大鼠模型的实验方法,为进一步阐明CKD所致血管钙化机制及其防治提供可靠的实验平台。方法 45只SD大鼠随机分为对照组和CKD血管钙化组,实验组给予2.5%腺嘌呤混悬液灌胃,联合1.8%高磷饲料喂养;对照组予以等量生理盐水灌胃,普通饲料喂养;分别于第2、4、6周收集尿液、血液、肾脏及主动脉标本;经腹主动脉取血测定肾功能、钙、磷等,HE染色观察肾脏病理改变,Von Kossa染色、钙含量测定评估主动脉钙化情况;免疫组化法检测主动脉α-SMA、Runx2蛋白表达量,RT-PCR检测大鼠主动脉α-SMA、Runx2 mRNA水平。结果 1.生化指标:与对照组相比,各时间点CKD组的24小时尿蛋白定量、肌酐及尿素氮水平均明显升高(P<0.01);血磷及钙磷乘积水平明显增加(P<0.01),血钙自第4周起明显降低(P<0.05);2.肾脏病理:对照组肾脏结构形态正常;CKD组逐渐出现肾脏结构紊乱,皮髓质分界不清,肾小球显著萎缩,囊腔显著扩张,肾小管扩张,部分上皮细胞变性坏死,管内可见大量棕黄色颗粒物质沉积,肾间质明显纤维化,血管明显减少,可见炎性细胞浸润;3.主动脉钙化:1Von Kossa染色:对照组主动脉无明显黑色颗粒物沉积;CKD组主动脉逐渐出现黑色颗粒物质沉积,中膜平滑肌纤维断裂,血管僵硬度显著增加;2主动脉钙含量:与对照组相比,各时间点CKD组主动脉钙含量均显著增高(P<0.01);3免疫组化结果:与对照组相比,CKD组各时间点主动脉平滑肌α-SMA蛋白表达明显减少(P<0.05),而Runx2蛋白表达明显增加(P<0.05);4RT-PCR结果:与对照组相比,CKD组主动脉各时间点α-SMA mRNA表达显著降低(P<0.01),而Runx2 mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论腺嘌呤灌胃加高磷饮食较传统方法,具有更加快速、简便、准确等的特点,为慢性肾脏病血管钙化研究提供了一个可靠的动物模型。

• 单位
  西南医科大学