纤溶酶原K5抗血管增生活性依赖其完整Kringle结构域

作者：李朝阳; 蔡卫斌; 杨中汉; 杨霞; 宋志宏; 周世豪; 李明友; 刘祖国; 高国全

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2006, (01): 17-23.

DOI：10.13865/j.cnki.cjbmb.2006.01.003

• 纤溶酶原
• Kringle5
• 血管增生抑制因子
• 缺失突变体
• 结构与功能

根据K5蛋白(Pro451—Ala541)的结构特征和二硫键分布特点,设计K5的两个缺失突变体K5 mut1(Cys461—Cys540,保留K5 kringle环3个完整二硫键但去除N端和C端多余氨基酸)和K5mut2(Cys482—Cys535,打开kringle环,只保留2个二硫键).以野生型人纤溶酶原K5 cDNA为模板,用PCR方法得到编码缺失突变体的DNA片段,定向克隆入pET22b(+)质粒载体,重组体转化进大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达,产物经亲和层析和高浓度甘油透析纯化后进行鉴定和生物活性测定.K5 mut1蛋白特异性抑制人视网膜微血管内皮细胞增殖,且活性强度是完整的K5蛋白2倍;K5mut2对人视网膜微血管内皮细胞无显著抑制作用.结果提示,完整的Kringle结构(包含3个二硫键)是维持人纤溶酶原K5抗血管增生活性的必需结构域,而K5分子中Kringle结构域外的N端和C端氨基酸臂则并非其活性所必需.

• 单位
  中山大学中山眼科中心; 生物化学教研室; 基础医学院; 中山大学