葫芦素B调控糖酵解抑制HuCCT1细胞增殖的作用机制

作者：李励; 邓冬杰; 谈相云; 孙懿; 王楚婷; 郑国华^*; 胡俊杰^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2022, 28(16): 74-81.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221624

• 葫芦素B
• 肝内胆管癌
• 蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)通路
• 糖酵解
• HuCCT1细胞增殖

目的：探究葫芦素B(CuB)抑制细胞增殖和糖酵解的作用机制。方法：采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测CuB(0、40、80、120、160、200、400、800 nmol·L-1)对Hu CCT1细胞增殖的影响；采用平板克隆实验检测CuB(50、100、200 nmol·L-1)对Hu CCT1细胞集落形成能力的影响；采用流式细胞术检测CuB(50、100、200 nmol·L-1)对Hu CCT1细胞周期的影响；采用可见分光光度法检测CuB(50、100、200 nmol·L-1)给药后Hu CCT1细胞中糖酵解关键酶己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)活性，及葡萄糖消耗量、乳酸生成量和三磷酸腺苷(ATP)生成量的变化；采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CuB对细胞周期相关蛋白、增殖相关蛋白、糖酵解关键蛋白及蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/m TOR)通路相关蛋白表达情况的影响。结果：与空白组比较，给药24 h,160～800 nmol·L-1CuB，给药48 h后80～800 nmol·L-1可以抑制Hu CCT1细胞增殖(P<0.05,P<0.01)，并呈时间和浓度依赖性，给药48 h半数抑制浓度为200 nmol·L-1;CuB可以呈浓度依赖性的抑制Hu CCT1细胞集落形成能力(P<0.01);CuB能够将Hu CCT1细胞周期阻滞在G2期(P<0.05,P<0.01);CuB(100、200 nmol·L-1)可以抑制糖酵解关键酶HK、PK的活性，并降低细胞葡萄糖消耗量及乳酸和ATP的生成量(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果显示，CuB(100、200 nmol·L-1)可以抑制周期相关蛋白Cyclin B1、增殖细胞核抗原(PCNA)、己糖激酶1(HK1)、己糖激酶2(HK2)、丙酮酸激酶1(PKM1)、丙酮酸激酶2(PKM2)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化m TOR(p-m TOR)及磷酸化核糖体蛋白(p-RPS6)的蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论：CuB可能通过调控Akt/m TOR通路抑制Hu CCT1细胞糖酵解进而影响细胞增殖。

• 单位
  湖北中医药大学