建立FQ-PCR定量体系检测新型隐球菌CAP10 mRNA

作者：戴琳孙; 林旎; 陈勇; 江凌; 程祖建; 欧启水

来源：福建医科大学学报, 2009, 43(01): 45-48.

DOI：10.3969/j.issn.1672-4194.2009.01.011

• 细胞荚膜
• 隐球菌,新型
• 真菌蛋白质类
• 逆转录聚合酶链反应
• mRNA,信使

目的建立荧光定量PCR(FQ-PCR)技术定量检测新型隐球菌(CN)的荚膜相关蛋白10(CAP10)基因mRNA,为新型隐球菌的诊断、预后及疗效判断提供依据。方法用逆转录PCR的方法从CN标准株(ATCC34874)中扩增得到CAP10,构建重组质粒标准品pGEMT-Easy-CAP10,以倍比稀释的标准品制备标准曲线。设计引物和探针,建立FQ-PCR反应体系并对其重复性、特异性和线性范围进行评价。结果成功构建了重组质粒标准品pGEMT-Easy-CAP10,并用倍比稀释的标准品制备了标准曲线Y=-3.11X+38.84。批内重复性试验CV值为0.31%,批间重复性试验CV值为2.73%。FQ-PCR体系能特异扩增新型隐球菌,特异性好,该体系的线性范围为101copies/μL～108copies/μL。结论成功建立CN的CAP10 mRNA的定量检测方法;该方法重复性好,特异性强。

• 单位
  福建医科大学附属第一医院; 福建医科大学